1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘。
柚皮素英文名稱：NaringeninCAS號：480-41-1分子式：272.25278
羽扇豆醇英文名稱：LupeolCAS號：545-47-1分子式：426.7174
鳶尾苷元磺酸鈉英文名稱：Tectorigenin sodium sulfonateCAS號：548-77-6分子式：300.26
原花青素英文名稱：Primary anthocyaninCAS號：4852-22-6分子式：594.52
α-香附酮英文名稱：A-cyperoneCAS號：473-08-5分子式：218.33458
槲皮苷英文名稱：QuercitrinCAS號：522-12-3分子式：448.3769
西貝堿英文名稱：SipeimineCAS號：61825-98-7分子式：429.64
西紅花苷Ⅱ英文名稱：Crocin IICAS號：55750-84-0分子式：814.82
西紅花苷I英文名稱：Crocin ICAS號：94238-00-3分子式：976.96456
仙茅苷英文名稱：Cents aCAS號：85643-19-2分子式：466.44
相思豆堿 英文名稱：Acacia baseCAS號：21339-55-9分子式：218.25
香蒲新苷英文名稱：TyphaneosideCAS號：104472-68-6分子式：770.68528